大鼠体内Pig-a基因突变试验影响因素研究

更新时间:2023-05-28

【摘要】目的为进一步完善和推广应用Pig-a基因突变试验,本研究拟在本实验室建立的试验方法基础上,对影响试验结果稳定性的3种主要影响因素进行探讨。方法 15只雄性SD大鼠按照体重随机分为3组:溶媒对照组（PBS,pH=6. 0）、N-乙基-N-亚硝基脲（N-Ethyl-N-nitrosourea,ENU） 20和80 mg/kg·bw剂量组。连续经口灌胃3 d,于暴露后28 d取血。按照本实验室已建立的流式细胞术Pig-a基因突变试验双染（CD59-APC/SYTO 13）或三染（CD59-APC/CD61-PE/SYTO 13）方案,针对网织红细胞突变频率(RETCD59-)、成熟红细胞突变频率(RBCCD59-)和网织红细胞比例3项指标,分别进行多项影响因素检测:样本贮存液和贮存时间[肝素钠抗凝剂和血液保存液-1 （枸橼酸-磷酸-葡萄糖-腺嘌呤,citrate phosphate dextrose adenine-1,CPDA-1）,0～6 d]、样本染色前贮存时间（0～24 h）和样本染色后固定和贮存时间（1%多聚甲醛,0～24 h）。结果使用双染方案时,4℃避光保存条件下,CPDA-1保存6 d内RBCCD59-、RETCD59-和RET比例指标均未见明显影响（P>0. 05）;而肝素钠溶液第3天即可观察到RETCD59-明显升高,与第0天相比差异具有统计学意义（P0. 05）;而6 h时使用双染方案检测可观察到与第0 h相比,RETCD59-差异具有统计学意义（PCD59-差异具有统计学意义（PCD59-和RET比例降低幅度更为明显（P<0. 05）。结论使用CPDA-1保存血液样本时（避光4℃）,可使样本保存时间延长至6 d（双染方案）。使用肝素钠溶液保存血液样本时（避光4℃）,双染方案检测时间需在6 h内,而三染方案检测时间可延长至24 h。1%多聚甲醛固定可能不适用于Pig-a基因突变试验。

【关键词】 Pig-a基因突变 流式细胞术 大鼠 CPDA-1 样本贮存时间 多聚甲醛

阅读全文